কোষ সংস্কৃতিগুলির ক্রিওপ্রিজারেশন জন্য প্রাথমিক টিপস

কোষ সংস্কৃতিগুলির ক্রিওপ্রিজারেশন জন্য প্রাথমিক টিপস

কোষগুলি স্বাভাবিক বৃদ্ধির ক্রিয়াকলাপগুলির সময় তাদের বিপাক চালিয়ে যায়, যার জন্য বিভিন্ন প্রোটেসের অংশগ্রহণ প্রয়োজন। তাপমাত্রা -70 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেডের নীচে নেমে গেলে প্রোটেসগুলি কাজ বন্ধ করে দেয়। অতএব, অত্যন্ত কম তাপমাত্রার পরিবেশে, কোষগুলি তাদের বিপাকীয় ক্রিয়াকলাপগুলি বন্ধ করতে পারে এবং একটি সুপ্ত অবস্থায় প্রবেশ করতে পারে যা দীর্ঘমেয়াদী স্টোরেজকে অনুমতি দেয়।

1. পরীক্ষামূলক উপকরণ

বেস উপাদান:

বেসিক সংস্কৃতি মাধ্যম

সিরাম (প্রচলিত এফবিএস/এনবিএস)

আল্ট্রাপিউর ওয়ার্কবেঞ্চ

জীবাণুমুক্ত ডাইমেথাইল সালফক্সাইড (ডিএমএসও)

জীবাণুমুক্ত পিবিএস ফসফেট বাফার লবণ দ্রবণ

পাইপটিং বন্দুক

বৈদ্যুতিন পাইপটিং বন্দুক

পরীক্ষা -নিরীক্ষা

ক) হিমশীতল সমাধানের প্রস্তুতি:

সাধারণ কোষ: 55% বেসাল মিডিয়াম + 40% বোভাইন সিরাম (এফবিএস/এনবিএস) + 5% ডিএমএসও

গুরুত্বপূর্ণ কোষ: 90% বোভাইন সিরাম (এফবিএস/এনবিএস) + 10% ডিএমএসও

15 মিলি সেন্ট্রিফিউজ টিউব [নেস্ট] এ প্রস্তুত ক্রিওপ্রিজারেশন দ্রবণটি অ্যালিকোট করুন এবং পরে ব্যবহারের জন্য 4 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেডে সঞ্চয় করুন।

(খ) হিমায়িত হওয়ার জন্য কোষ প্রস্তুত করা:

কোষগুলি হিম করার আগে, ভাল বৃদ্ধির স্থিতি এবং লোগারিদমিক বৃদ্ধির পর্যায়ে কোষগুলি নির্বাচন করুন এবং কোষের অবস্থা বজায় রাখার জন্য হিমশীতল হওয়ার 12-24 ঘন্টা আগে তাদের তাজা মাঝারি দিয়ে প্রতিস্থাপন করুন।

2. পরীক্ষামূলক পদ্ধতি

1. কোষগুলির ঘনত্ব হিমায়িত হওয়ার জন্য পর্যবেক্ষণ করুন, যা প্রায় 80%~ 90%। পুরানো মাধ্যমটি উচ্চাকাঙ্ক্ষী করতে, কোষগুলি 1-2 বার ধুয়ে জীবাণুমুক্ত পিবিএস যুক্ত করতে এবং সংস্কৃতির পরিবেশে অবশিষ্ট মাধ্যমটি সরিয়ে ফেলার জন্য একটি পিপেট বন্দুক ব্যবহার করুন।

২. ট্রাইপসিনকে কোষগুলিতে প্রবেশের অনুমতি দেওয়ার জন্য উপযুক্ত পরিমাণে ট্রাইপসিন বা হজম রস যুক্ত করুন এবং হজমের জন্য ইনকিউবেটারে রাখুন। মাইক্রোস্কোপের অধীনে কোষগুলির অবস্থা পর্যবেক্ষণ করুন: সাইটোপ্লাজমটি প্রত্যাহার করছে এবং কোষগুলি আর শিটের সাথে সংযুক্ত নেই। এই মুহুর্তে, হজম প্রক্রিয়া বন্ধ করতে স্টপ সলিউশন যুক্ত করুন।

৩. একটি সেল সাসপেনশন গঠনের জন্য একটি টিপ সহ কোষগুলিকে আলতো করে বুদবুদ করে এবং 3-5 মিনিটের জন্য 1000 আরপিএম এ সেল সাসপেনশন সেন্ট্রিফিউজ করে।

সুপারেনট্যান্টকে বাতিল করুন, উপযুক্ত পরিমাণ জমাট সমাধান যুক্ত করুন এবং কোষগুলিকে অভিন্নভাবে গণনা করতে আলতো করে পাইপেট করুন। চূড়ান্ত ঘনত্ব 5 × 106/এমএল ~ 1 × 107/এমএল তৈরি করতে ক্রিওপ্রিজারেশন মিডিয়ামের সাথে কোষের ঘনত্বটি সামঞ্জস্য করুন।

৪. প্রত্যাশিত ক্ষমতা অনুযায়ী ক্রিওজেনিক টিউবগুলি পৃথক করতে একটি পিপেট গান ব্যবহার করুন এবং ক্যাপ এবং সিল করতে একটি স্বয়ংক্রিয় ক্যাপিং মেশিন ব্যবহার করুন।

৫. স্ট্যান্ডার্ড ক্রিওপ্রিজারেশন প্রোগ্রামটি -1 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেড থেকে -2 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেড/মিনিটের শীতল হার এবং হিমায়িত কোষগুলি ধীরে ধীরে নিম্নলিখিত পদক্ষেপগুলি অনুসারে হিমায়িত করা যায়: ঘরের তাপমাত্রা → 4 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেড (20 মিনিট) → - - 20 ° C (30 মিনিট) → -80 ° C ° C (রাতারাতি) → তরল নাইট্রোজেনে দীর্ঘমেয়াদী স্টোরেজ।

এটি রাতারাতি -80 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেডে সরাসরি ফ্রিজারেও সংরক্ষণ করা যায় এবং তারপরে স্টোরেজের জন্য তরল নাইট্রোজেনে স্থানান্তরিত হয়।

ইয়ংইউ মেডিকেল হ'ল একটি উচ্চ প্রযুক্তির এন্টারপ্রাইজ যা গবেষণা ও উন্নয়ন, বায়োমেডিকাল ভোক্তাগুলির উত্পাদন এবং বিক্রয়গুলিতে বিশেষজ্ঞ। পাইপেট টিপস, পাইপেটস, পিসিআর প্লেট, সেল সংস্কৃতি পণ্য এবং অন্যান্য জৈবিক পরীক্ষাগার উপভোগযোগ্য। ইয়ংয়েউ মেডিকেল আপনার বিশ্বাস এবং পছন্দের যোগ্য! পরামর্শে স্বাগতম!